Алкоголизм является одной из важных медико-социальных проблем современного человека. Под влиянием алкоголя в организме человека происходят глубокие и необратимые изменения. Этанол является очень токсичным и коварным ядом. Печень, поджелудочная железа, головной мозг – это те органы, которые наиболее чувствительные к действию алкоголя [4,6].
В настоящее время существует очень большое количество причин, приводящих в развитию воспаления поджелудочной железы. Одним из основных, а можно сказать главенствующим, фактором, приводящим к развитию панкреатита, является злоупотребление алкоголем.
При длительном приеме алкоголя развивается вторичный иммунный дефицит, нарушаются структурно-функциональные свойства клеточных мембран эритроцитов [1-3, 5]. Алкоголь является одним из ведущих факторов в развитии патогенеза заболеваний гепатопанкреатобилиарной системы с последующим присоединение на этом фоне различной соматической патологии, которые требуют фармакологической коррекции [6-9]. В связи с этим, очевидна целесообразность дальнейшего изучения метаболических нарушений печени при интоксикации этанолом на фоне экспериментального острого деструктивного панкреатита и разработки новых методов фармакологической коррекции.
Целью работы - изучение влияния этанола на изменение биохимической активности гепатоцитов на фоне экспериментального острого деструктивного панкреатита и их последующая фармакологическая коррекция.
Материалы и методы
Исследования проведены на здоровых крысах Вистар. Все исследования проводили в одно и то же время суток с 8 до 12 ч., содержание и забой животных проводили с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986), и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003г.). Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 10-15 животных. Животных выводили из эксперимента путем передозировки средств для наркоза.
Модель хронической алкогольной интоксикации (ХАИ) получали путем введения 20% раствора этанола в дозе 3 мл/кг внутрижелудочного в течение 30 дней каждые 24 часа. На 25 день после введения этанола экспериментально вызывали острый деструктивный панкреатит (ЭОДП). Для этого перевязывали протоки левой и правой долей поджелудочной железы и стимуляцию проводили путем введения прозерина в дозе 0,2 мг/кг три раза с интервалом 60 мин.
Коррекцию изменений биохимической активности клеток печени на фоне экспериментального острого деструктивного панкреатита проводили с помощью фармакологических препаратов. Были выбраны иммуномодуляторы – гепон и глутоксим, антиоксиданты – гипоксен и мексидол, гепатопротекторы – фосфоглив и гептрал.
Расчет дозы лекарственных препаратов для введения экспериментальным животным проводили при помощи коэффициентов пересчета доз (мг/кг на мг/м2) для крысы и человека в зависимости от массы тела (FreIreich E.J., 1966).
Экспериментальных животных делили на 5 групп: 1-я группа (контрольная) - 15 здоровых животных; 2-я группа ХАИ-30; 3-я группа – ХАИ-30 и ЭОДП без введения препаратов; 4-я группа - ХАИ-30 + ЭОДП и получала гепон (5 мг/кг, внутрь, через 24 часа, №14), гипоксен (750 мг/кг, внутрь в 1% крахмальной суспензии, №14) и фосфоглив (800 мг/кг, внутрь в 1% крахмальной суспензии, №14); 5-я группа - ХАИ-30 + ЭОДП и введение глутоксим (20 мг/кг, внутримышечно, через 24 часа, №5), мексидол (50 мг/кг внутрибрюшинно, через 24 часа, №5) и гептрал (760 мг/кг, внутрибрюшинно, через 24 часа, №5). Через 24 часа после последнего введения этанола и препаратов проводили забой крыс.
Для оценки изменения биохимической активности гепатоцитов, вызванного отравлением этанола на фоне экспериментального острого деструктивного панкреатита проводили с помощью стандартных наборов реактивов. Определяли активность аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), гамма-глутаминтранспептидазы (ГГТП), щелочной фосфатазы (ЩФ), билирубина, протромбинового индекса (ПТИ). Концентрацию фибриногена определяли методом Рутберга. Статистическую обработку результатов исследования проводилась с помощью вычисления средних арифметических, стандартных ошибок и ошибок средних. Существенность различий средних величин оценивали по критерию Стьюдента.
Результаты исследования
Коррекция нарушений функциональной активности гепатоцитов при ЭОДП на фоне 30-дневной ХАИ
|
Показатели |
Единицы измерения |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
Контроль |
ХАИ-30 |
ЭОДП на фоне 30-дневной ХАИ |
||||
|
Без введения препаратов |
Введение гепона, гипоксена и фосфоглива |
Введение глутоксима, мексидола и гептрала |
||||
|
АЛТ |
Е/л |
20,2±2,39 |
41,1±3,49*1 |
51,67±11,9*1 |
37,57±5,51*1,2 |
26,7±1,5*1-3 |
|
АСТ |
Е/л |
21,2±1,59 |
36,4±2,8*1 |
43,1±3,89*1,2 |
22,5±2,7*2,3 |
22,4±2,17*1-4 |
|
ГГТП |
Е/л |
4,9±0,23 |
7,63±1,01*1 |
28,83±1,56*1,2 |
30,4±2,52*1,2 |
14,8±1,5*1-3 |
|
ЩФ |
Е/л |
250,3±18,7 |
292,2±26,1 |
472,3±16,6*1,2 |
328,7±23,2*1,3 |
267,0±49,8*2,3 |
|
Билирубин |
мкмоль/л |
5,84±1,29 |
8,03±1,09*1 |
16,38±1,61*1,2 |
11,05±2,23*1,2 |
6,6±1,13*2,3 |
|
ПТИ |
% |
63,1±1,65 |
72,5±0,96*1 |
71,2±2,27*1 |
69,8±2,27*1 |
59,0±3,57*2,3 |
|
Фибриноген |
г/л |
3,22±0,08 |
2,34±0,25*1 |
2,55±0,13*1 |
2,85±0,24*1 |
3,05±0,25*2,3 |
Примечание: * – p=0,05, цифра рядом со звездочкой указывает, по отношению к показателю какой группы различия достоверны.
У животных введение этанола в течение 30 дней по сравнению с контрольной группой изменило все исследованные показатели функциональной активности гепатоцитов: повысились ПТИ, увеличилась активность АСТ, АЛТ, ГГТП и содержание билирубина, снизилась концентрация фибриногена. У крыс с ЭОДП на фоне ХАИ-30 наблюдалось более выраженное развитие цитолитического синдрома (повышение активности АЛТ и АСТ), внутриклеточного холестаза (повышение содержания билирубина, активности ЩФ и ГГТП), токсического поражения печени по воспалительному типу при сохранении на одном уровне синдрома недостаточности синтетических процессов (снижение уровня фибриногена) и активация свертывающей системы крови (повышение ПТИ) (см. табл.). Полученные результаты свидетельствуют о выраженном нарушении функциональной активности гепатоцитов. Повышение уровня ПТИ можно расценивать как маркер системных воспалительных изменений на фоне экспериментального острого деструктивного панкреатита (см. табл.).
Введение экспериментальным животным с ЭОДП на фоне 30-дневной интоксикации этанолом сочетания гепона, гипоксена и фосфоглива корригировало, но не до уровня здоровых животных, содержание АЛТ, ЩФ, билирубина (см. табл.).
Данная фармакологическая комбинация не оказывала влияния на измененные концентрации в плазме крови ГГТП, ПТИ и фибриногена. Комбинация таких препаратов как глутоксим, мексидол и гептрал была более эффективна: уровень ЩФ, билирубина, ПТИ, фибриногена в крови приближался к показателя здоровых животных, а так же корригировало активность АЛТ, АСТ и ГГТП (см. табл.).
Выводы
Полученные нами данные позволяет заключить, у животных с ЭОДП на фоне интоксикации этанолом наблюдается развитие основных биохимических синдромов поражения печени: цитолитического, внутриклеточного холестаза, токсического поражения по воспалительному типу и недостаточности синтетических процессов.
Применение сочетания глутоксимом, мексидола и гептрала в качестве фармакологической коррекции оказалось более эффективным по сравнению с введением гепона, гипоксена и фосфоглива. Данный эффект можно объяснить тем, что все три препарата, которые вводились крысам пятой группы, обладают выраженной противовоспалительной активностью, антиоксидантными и гепатопротективными эффектами, и следовательно, они более предпочтительны в разгар развития метаболического каскада воспаления печени.