Известно, что инфекционный эндокардит грибковой этиологии чаще встречается у наркоманов, больных со сниженным иммунитетом [1, 4], а также пациентов с искусственными клапанами сердца. Основные возбудители данной патологии – представители родов Candida и Aspergillus. В иммунопатогенезе существенную роль играет активация гуморального ответа, которая сопровождается появлением специфических антител. С ними связано образование циркулирующих иммунных комплексов, обнаруживаемых примерно у 90 % больных. Однако существует некоторый недостаток информации об иммунопатогенезе системного воспалительного ответа при инфекционном эндокардите. Это значительно препятствует разработке новых подходов, как к терапии, так и к профилактике осложнений в раннем послеоперационном периоде протезирования клапанов сердца у таких пациентов [3].
Цель исследования – изучить фагоцитарную активность клеток периферической крови пациентов с инфекционным эндокардитом в отношении Candida albicans.
Материалы и методы исследования
В исследовании использованы пробы периферической крови 11 пациентов с инфекционным эндокардитом и 10 практически здоровых добровольцев. 0,025 мл отмытых грибков рода Candida (100/106 на мл) было добавлено к 0,025 мл гепаринизированной (50 МЕ/мл) крови в микропробирках с антиадгезионной поверхностью. Образцы инкубировали в течение 20 минут при температуре 37 °С. Перечень нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов, которые поглотили разное количество грибков был проведен на мазках, окрашенных красителем Гимзы, в общей сложности было подсчитано 300-600 клеток каждого типа в каждом образце. Был подсчитан процент каждого типа клеток с поглощенными грибками (процент фагоцитоза), фагоцитарное число (среднее количество грибков, поглощаемое одной клеткой), абсолютное количество каждого типа клеток с поглощенными грибками на мм3 крови и абсолютное количество поглощенных грибков в мм3 крови. Из полученных проб периферической крови были приготовлены микроскопические препараты, которые после фиксации окрашивали по методу Романовскому-Гимза. В препаратах при масляной иммерсии оценивали число отдельных типов лейкоцитов. Для изучения фагоцитарной активности клеток использовали методику Каплина В.Н. [2] в модификации [5]. В качестве объекта фагоцитоза были выбраны живые клетки Candida albicans.
Для статистического анализа полученных данных использовали t-критерий Стьюдента.
Результаты исследования и их обсуждение
В ходе проведенных исследований было установлено, что число лейкоцитов периферической крови у пациентов с инфекционным эндокардитом составляет 8580 ± 1431 в 1 мкл, а в контрольной группе – 7289 ± 739 в 1 мкл (p>0,05; рис. 1).
Рис. 1. Количество лейкоцитов у пациентов с инфекционным эндокардитом (в 1 мкл)
Рис. 2. Количество нефагоцитирующих нейтрофилов в 1 мкл крови
Рис. 3. Число активно фагоцитирующих нейтрофилов в 1 мкл крови
Содержание палочкоядерных нейтрофилов у пациентов с инфекционным эндокардитом составило 339 ± 60 в 1 мкл, а у добровольцев контрольной группы – 153 ± 37 в 1 мкл (p < 0,05). В то же время количество моноцитов и лимфоцитов в периферической крови у пациентов с инфекционным эндокардитом меньше, чем у лиц контрольной группы.
При инфекционном эндокардите фагоцитарная активность клеток периферической крови по отношению к C. albicans увеличивается. Количество нефагоцитирующих лейкоцитов у пациентов 71,9 ± 3,6 %, а у практически здоровых добровольцев – 92,4 ± 0,8 % (p < 0,05) (рис. 2).
Весомую роль в процессе фагоцитоза при инфекционном эндокардите играют нейтрофильные лейкоциты – 92,2 ± 3,2 %. В крови пациентов увеличено количество нейтрофилов, поглощающих от 1 до 3 клеток C. albicans, а количество нефагоцитирующих нейтрофилов снижено. Фагоцитарное число составило 1,9 ± 0,4, тогда как в контрольной группе – 1,1 ± 0,05 (p < 0,05). Особое внимание стоит уделить тому факту, что количество активно-фагоцитирующих нейтрофилов при инфекционном эндокардите 8,8 ± 2,2 % (в контрольной группе – 0,6 ± 0,5 %; p < 0,05). В сравнении с этим роль мононуклеарных клеток при фагоцитозе у пациентов с ИЭ незначительна. Они фагоцитировали не более 2 клеток (рис. 3).
Заключение
При инфекционном эндокардите активируется фагоцитоз клетками периферической крови грибов рода Candida. Значительный вклад в активность фагоцитоза вносят нейтрофилы, тогда как роль моноцитов в этом процессе минимальна.