В последние несколько лет наблюдается интенсивный рост публикаций в PubMed посвященных исследованиям на мышах. Ученые описывают как фундаментальные проблемы, так и прикладные задачи, лежащие в основе разных заболеваний. Использование неинвазивного измерения ЭКГ у мелких грызунов позволяет получить серии продолжительных записей у одних и тех же экспериментальных животных. Такие записи позволяют изучать новые параметры электрофизиологии экспериментальных животных. Одним из таких малоизученных параметров для мелких грызунов является «вариабельность». Целью работы является измерение вариабельности ритма сердца у интактных мышей на записях ЭКГ длительностью 30 с.
Материалы и методы. В качестве экспериментальных животных были использованы половозрелые интактные мыши линии CBA (38 ±4г). Группа экспериментальных животных включала 5 самцов. Регистрация ЭКГ проводилась у бодрствующих животных в трех стандартных отведениях по Эйнтховену. Мышь помещали в прозрачную камеру (имитирующую «нору»). Для доступа кислорода в камере (пенале) были сделаны отверстия. Движение животного ограничивалось со всех сторон стенками камеры, выполненной из оргстекла, сзади подвижная заслонка с отверстием для хвоста. Снизу расположены 4 пластинки из нержавеющей стали не соприкасающиеся друг с другом – электроды. Медиально у всех электродов есть небольшой бортик 2-3 мм, чтобы лапы животного располагались раздельно. Электроды с помощью винтовых клемм и медных проводников соединялись с усилителем NVX36. Регистрация сигналов проводилась на персональном компьютере с помощью программного обеспечения PolyRec при частоте дискретизации 1 кГц (скорость записи – 100 мм / сек, амплитуда – 50 мм / мВ, фильтр верхних частот – 1 Гц, фильтр нижних частот – 70 Гц). Непосредственная регистрация ЭКГ производилась через 10-15 мин после адаптации животного к пеналу. Длительность времени записи составляла 30 секунд, и была получена по формуле для расчета вариабельности сердечного ритма у мышей, опираясь на данные, используемые для человека:
,
где Ту – длительность записи ЭКГ у мышей, Тх – длительность записи ЭКГ у человека для анализа вариабельности сердечного ритма (5 мин), Х1 и Х2 – границы нормы частоты сердечных сокращений (ЧСС) человека в покое, составляющие 60 и 90 уд / мин соответственно, Y1 и Y2 – границы частоты сердечных сокращений мыши линии СВА в покое, составляющие 741 и 787 уд / мин соответственно (S. Xingс соавт., 2009). Анализ полученных данных ЭКГ производился в EDFbrowser и Polyman. ЧСС рассчитывалась исходя из подсчета количества QRS комплексов за две секунды, помноженного за 30. Расчет вариабельности проводился в программном пакете Microsoft Office (Excel).
Результаты. При анализе формы данных получаемого сигнала на протяжении 30-ти секунд отсутствуют артефакты, что указывает на состояние покоя животного и отсутствия у него стресса. ЧСС составила 740 ± 25 ударов в минуту. Проведенные измерения ЭКГ сопоставимы с результатами, полученными исследователями из лаборатории Джексона (S. Xingс соавт., 2009). Вся запись была разделена на 6 отрезков, по 5 сек каждый. Для каждого из участков мы рассчитали среднюю длительность RR интервала. Далее определили параметр ВКР (вариация короткого участка ритмограммы) по формуле, представленной в монографии «Вариабельность ритма сердца» (Рябыкина Г.В., Соболев А.В., 1998 г.). В группе исследуемых мышей мы получили следующие цифры: мышь 1 – 1,64, мышь 2 – 2,72, мышь 3 – 1,02, мышь 4 – 2,68, мышь 5 – 2,16. У двух мышей из 5 мы видим ВКР равный 1,02 и 1,64, у остальных животных из группы он более 2-х.
Полученный значительный разброс от средних значений ЧСС связан с высокой частотой 780 уд / мин у 1-ой мыши. Так же мы отмечаем двукратное увеличение амплитуды комплекса QRS у этого животного (ВКР у этой мыши 1,64).
Выводы. Разработанная методика неинвазивной регистрации ЭКГ мелких лабораторных животных, находящихся в сознании, позволяет проводить хронические эксперименты с большой пропускной способностью. Так же данный метод допускает получать данные длительностью больше полуминуты. Интервал времени, соответствующий в среднем 30-ти секундам, является необходим для расчета вариабельности сердечного ритма у мышей. Полученные значения ВКР у группы исследуемых мышей совпадают по внутригрупповым отличиям с данными анализа ЧСС. Как диагностический критерий вариабельность (в виде расчета ВКР) может оценивать либо нарушения работы ССС у мелких грызунов, либо характеризовать уровень стресса у исследуемого животного. В связи с отсутствием научных работ, посвященных анализу вариабельности сердечного ритма у животных, наши предварительные результаты и выводы требуют проверки при проведении крупных исследований.