В последнее время возросло число термических ожогов в быту, производственных условиях и военных конфликтах [2, 3]. Среди методов лечения ожоговых ран важное место занимает медикаментозная терапия, направленная на стимуляцию заживления раневой поверхности. Несмотря на существующий арсенал лекарственных средств для местного лечения ожогов, их эффективность недостаточна [3]. Это обуславливает необходимость разработки новых лекарственных средств, обладающих репаративной активностью. Перспективным направлением для создания новых лекарственных средств является использование наноматериалов в составе лекарственных форм путем образования комплекса между известными лекарственными средствами и наночастицами, в частности наночастицами серебра (НЧС), обладающего противовоспалительным, противомикробным, иммуномодулирующим действием [1, 9, 11, 12]. Харьковским национальным медицинским университетом предложена новая субстанция, содержащая тиотриазолин (обладает антиоксидантным, мембраностабилизирующим и иммуномодулирующим действием [10]) и НЧС. Субстанция получена в Международном центре электронно- лучевых технологий Института электросварки им. Е.О. Патона НАН Украины. Метод получения НЧС, предложенный академиком Б.А. Мовчаном [6], состоит в электронно-лучевом выпаривании и конденсации веществ в вакууме и отличается от других методов вакуумного выпаривания универсальностью, технологической гибкостью, производительностью и экономичностью. На основе субстанции совместно с ОАО «Химфармзавод «Червона зірка» изготовлена мазь тиотриазолина, которая содержит НЧС [7,8].
Цель данной работы - изучить влияние мази тиотриазолина с НЧС на течение процесса заживления ожоговой раны у крыс.
Материалы и методы. Исследования проведены на 24 крысах линии WAG, массой 180-250 грамм, разделенных на 5 групп (n=6): 1 – ожог без лечения (контроль), 2 – ожог + мазь «Аргосульфан» (Фармзавод Ельфа А.О., Польша), препарат сравнения 1, 3 – ожог + «Мазь тиотриазолина 2%» (ОАО «Химфармзавод «Червона зірка», Украина), препарат сравнения 2, 4 – ожог + мазь тиотриазолина с НЧС (0,00081%), основная группа. Данная концентрация получена в результате скрининговых исследований противовоспалительного действия мази с разной концентрацией НЧС. Животным всех групп на предварительно выстриженном участке спины вызывали термический ожог ІІІ А степени [5]. Мази наносили сразу после термического воздействия и ежедневно в течение последующих 28 суток. Ранозаживляющую активность мазей оценивали по данным визуального наблюдения (внешний вид раны, вид струпа, наличие отделяемого) и площади ожоговой поверхности, определяемой планиметрическим методом, на 7, 14, 21 и 28 сутки. Полученные данные обрабатывались статистически методом вариационной статистики, при сравнении выборок – с помощью критерия Стьюдента [4].
Эксперименты на животных проведены соответствии с Общими этическими принципами опытов на животных (Украина, 2001), которые согласуются с положениями Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (Страсбург, 1986), а также Хельсинкской декларацией, принятой Генеральной ассамблеей Всемирной медицинской ассоциации (1964–2000), Уставом Украинской ассоциации по биоэтике и нормами GLP (1992).
Результаты и их обсуждение. У животных без лечения (1 группа) сразу после термического воздействия ожоговая рана покрывалась сухим светло-коричневым струпом. Окружающие рану ткани были отечны и гиперемированы. Завершение формирования ожоговой раны происходило на 2-е сутки от начала опыта. С 3-их суток начиналось размягчение центральной части толстого струпа, при надавливании из-под него выделялся серозно-гнойный экссудат. На 7-е сутки ожоговая рана представляла собой зону глубокого некроза и серозно-гнойного экссудата. В тканях дна раны сохранялся отек с образованием грануляционной ткани на границе очага поражения. На протяжении следующих двух недель наблюдения (14-е – 21-е сутки) в центре ожоговой раны отмечались уменьшение зоны некроза и эпителизация раневого дефекта. Полного заживления раны к 28 суткам не происходило.
У животных с применением мази «Аргосульфан» (препарат сравнения 1) отмечалось улучшение течения репаративного процесса в сравнении с группой контроля. Начиная с 3-их суток, происходило размягчение центральной части толстого струпа, однако при надавливании из-под него выделялся лишь серозный экссудат. К 7-м суткам раневая поверхность была покрыта плотным струпом, экссудат отсутствовал даже при надавливании, к 9-10-м суткам происходила отслойка струпа и образование нового тонкого струпа. На протяжении следующих двух недель наблюдения (до 21-х суток) в центре ожоговой раны уменьшение зоны некроза, расплавление струпа и эпителизация раневого дефекта происходили быстрее, чем в группе контроля. К 28-м суткам ожоговая рана была полностью эпителизирована с образованием нежного рубца. Лечение мазью «Аргосульфан» сокращало площадь ожога относительно группы животных без лечения: к 7-м суткам – на 32%, к 14-м суткам – на 59%, к 21-м суткам – на 76 % и к 28-м суткам – на 97% (табл. 1).
Мазь тиотриазолина (препарат сравнения 2) показала еще более выраженный эффект. На 7 сутки отмечалась незначительная гиперемия и отёчность, количество серозного экссудата было снижено по сравнению с предыдущими группами. На протяжении следующих двух недель (до 21-х суток) зона некроза в центре ожоговой раны и эпителизация раневого дефекта происходила быстрее, отёк и гиперемия были менее выражены, чем в группах 1 и 2. К 28-м суткам раневой дефект был полностью эпителизирован, нежный рубец был более прочным и еле заметным.
Площадь раны у животных группы 3 была меньше, чем в контроле во все сроки наблюдения: на 7 сутки – на 34%, на 14 сутки – на 62%, на 21 сутки – на 97%, на 28 сутки – на 98%, в сравнении с площадью раны группы контроля. На 21 и 28 сутки площадь ожога также снижалась относительно группы 2 (мазь «Аргосульфан») на 54% и на 38% соответственно (табл. 1).
Таблица 1
Влияние мази тиотриазолина с НЧС на заживление термического ожога у крыс
|
Группы |
Сроки наблюдений |
|||
|
7-е сутки |
14-е сутки |
21-е сутки |
28-е сутки |
|
|
Ожог без лечения (контроль) |
342,56±31,40 |
163,3±23,1 |
59,3±9,4 |
2,28±0,39 |
|
Ожог+Мазь «Аргосульфан» |
233,93±40,59* |
67,58±11,01* |
14,13±5,53* |
0,06±0,02* |
|
Ожог+Мазь тиотриазолина |
226,08±34,45* |
62,28±13,67* |
6,57±2,13*$ |
0,037±0,01*$ |
|
Ожог+Мазь тиотриазолина с НЧС |
152,28± 33,92*$# |
57,04± 21,24* |
1,96± 2,15*$# |
0,01± 0,01*$# |
Примечания:
1. * - р< 0,05 – достоверность различий по сравнению с группой без лечения;
2. $ - р< 0,05 достоверность различий по сравнению с группой, получавшей мазь «Аргосульфан»;
3. # - р< 0,05 достоверность различий по сравнению с группой, получавшей мазь тиотриазолина.
Применение мази тиотриазолина, содержащей НЧС (основная группа), оказалось наиболее эффективным. С первых суток отмечалась невыраженная гиперемия с последующим образованием тонкого струпа коричневого цвета. На 3-и сутки происходило размягчение центральной части струпа, без выделения экссудата. Отёчность и гиперемия раны также были менее выражены, чем в группе без лечения и с применением препаратов сравнения. Зона некроза в центре ожоговой раны на протяжении следующих двух недель (до 21-х суток) уменьшалась гораздо быстрее, эпителизация раневого дефекта происходила активней, чем в предыдущих группах. К 21-м суткам у 50% животных был виден образовавшийся рубец. К 28-м суткам у 100% животных ожоговая рана была полностью эпителизирована. На фоне применения мази тиотриазолина, содержащей НЧС, выявлено ускорение степени заживления по сравнению с контрольной группой уменьшение площади раны на 56% (7 сутки), на 65% (14 сутки), на 97% (21 сутки), на 99,6% (28 сутки). Также у животных основной группы имела место более выраженная тенденция к уменьшению раневой поверхности в сравнении с препаратами сравнения (табл.1). Так, на 7, 21 и 28 сутки наблюдалось уменьшение поверхности ожоговой раны по сравнению с группой препарата сравнения 1 (на 34%, 86% и 83% соответственно) и препарата сравнения 2 (на 33%, 70% и 72% соответственно) (табл.1).
Таким образом, установлено, что мазь тиотриазолина, содержащая наночастицы серебра, оказывает выраженное ранозаживляющее действие при термическом ожоге у крыс, характеризующееся уменьшением воспалительных процессов в ране, сокращением площади ожога и сроков заживления. По репаративной активности мазь с наночастицами серебра превышала активность препаратов сравнения.
Выводы:
- Включение наночастиц в мазь тиотриазолина усиливает ее ранозаживляющее действие при термическом ожоге у крыс (уменьшает площадь и сроки заживления раны, способствует ускорению репаративных процессов).
- Противоожоговое действие мази тиотриазолина, содержащей наночастицы серебра, превосходит эффект препаратов сравнения - мази «Аргосульфан» и «Мази тиотриазолина 2%».