Электронный научный журнал
Международный студенческий научный вестник
ISSN 2409-529X

МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПАРО- И ПЕРИОДОНТА

Медведева Л.С. 1 Суворова М.Г. 1
1 ФГБОУ ВО Пермский государственный медицинский университет им. академика Е. А. Вагнера Минздрава России
По данным ВОЗ (2002), около 95% взрослого населения планеты и 80% детского населения имеют те или иные признаки пародонтопатий. На сегодняшний день имеется тенденция к увеличению количества больных с заболеваниями пародонта. Высокая распространенность заболеваний пародонта является одной из наиболее сложных и актуальных проблем в современной стоматологии. В последнее время увеличивается резистентность пародонтопатогенов к традиционной терапии, в связи с этим возникает проблема микробиологической диагностики для назначения адекватного лечения. Распространенность заболеваний периодонта среди взрослого населения в мире превышает 75 %, антимикробная терапия при данных заболеваниях является важным этапом эндодонтического лечения. В статье рассматриваются возможные варианты методов микробиологической диагностики при заболеваниях паро- и периодонта, преимущества и недостатки каждого из методов, что дает возможность врачу-стоматологу выбрать тот метод, который будет отвечать его целям, экономическим и техническим возможностям. С помощью описанных микробиологических методов исследования врач-стоматолог сможет оценить количественный и качественный состав микрофлоры биологического материала при заболеваниях паро- и периодонта, а также определить эффективность антибактериальной терапии при данных заболеваниях.
микрофлора
периодонтит
пародонтит
методы микробиологической диагностики.
1. Александрова А. А. Оценка стоматологического статуса и разработка комплекса индивидуальной гигиены полости рта у беременных с сахарным диабетом: (На правах рукописи). — Санкт-Петербург, 2017. — 137 с.
2. Аникаев А. Ю., Ломоносов А. М. Применение секвенирования нового поколения (NGS) в клинической Практике / А.Ю. Аникаев, А.М. Ломоносов // Лабораторная служба. – 2014. – № 1. – С. 32-36.
3. Быкова Л. П., Годовалов А. П., Сибиряков Д. А. Изучение антимикробной активности SalviaOfficinalisL. и FucusVesiculosusL. // Актуальные проблемы медицины (27 янв. 2015 г., г. Гродно) – Гродно, 2015. – С. 96-97.
4. Взятие, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики // Москва: ИнтерЛабСервис, 2010. — 36 с.
5. Годовалов А. П., Быкова Л. П. Антимикробная активность производных некоторых растений / А. П. Годовалов, Л. П. Быкова // Современные научные исследования и разработки. – 2017. – Т. 2, № 1. – С. 58-61.
6. Данилевский Н.Ф., Борисенко А.В. Заболевания пародонта / Н. Ф. Данилевский, А. В. Борисенко. – Киев: Здоровье, 2000. – 464 с.
7. Заболевания пародонта // Л. Ю. Орехова. – Москва: Поли Медиа Пресс, 2004. – С. 432.
8. Касоян К. Т., Джангирова Т. В., Шабалова И. П. Анализ результатов последовательного приготовления препаратов традиционным методом и методом жидкостной цитологии из материала из шейки матки / К. Т. Касоян, Т. В. Джангирова, И. П. Шабалова, Л. Г. Созаева // Новости клинической цитологии России. – 2012. – Т. 16, № 3-4. – С. 49.
9. Колчанова Н. Э. Роль микрофлоры и ее способность формировать биопленку в патогенезе хронического периодонтита / Н. Э. Колчанова // Вестник Витебского государственного медицинского университета. – 2017. –Т. 16, № 5. – С. 127-135.
10. Лопухов Л. В., Эйдельштейн М. В. Полимеразная цепная реакция в клинической микробиологической диагностике / Л. В. Лопухов, М. В. Эйдельштейн // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. – 2000. – Т. 2, № 3. – С. 96-106.
11. Митронин А. В., Царёв В. Н., Ясникова Е. Я. Особенности контаминации экосистемы корневых каналов на этапах эндодонтического лечения острого периодонтита / А. В. Митронин, В. Н. Царёв, Е. Я. Ясникова, Д. А. Черджиева // Оригинальные статьи. – 2008. – № 1. – С. 26-32.
12. Мозговая Л. А., Задорина И. И., Быкова Л. П. Микрофлора корневых каналов зубов в динамике лечения хронических форм апикального периодонтита / Л. А. Мозговая, И. И. Задорина, Л. П. Быкова, А. П. Годовалов // Саратовский научно-медицинский журнал. – 2013. – Т. 9, № 3. – С. 447-449.
13. Полимеразная цепная реакция в реальном времени (Real-Time PCR)/ Екимов А.Н., Шипулин Г.А., Бочкарев Е.Г. Рюмин Д.В. http://www.interlabservice.ru/catalog/faq/?id=3422 (дата обращения 03. 10. 2018)
14. Токмакова С. И., Чудова Л.В. Состав микрофлоры пародонтального кармана при тяжелых формах пародонтита, устойчивых к стандартному лечению / С. И. Токмакова, Л. В. Чудова // Проблемы стоматологии. – 2014. – № 6. – С. 20-23.
15. Шибаева А. В. Исследование бактериальных консорциумов в качестве этиологического фактора развития болезней пародонта: — Москва, 2017 — 201 с.
16. Шишкин А. В. Выявление грибов рода Candida в составе микробных ассоциаций в дентине корневых каналов зубов при хронических периодонтитах / А. В. Шишкин // Вестник новых медицинских технологий. – 2011. –Т. 18, № 2. – С. 221-223.
17. Юдина Н. А. Диагностика болезней периодонта / Н. А. Юдина // Современная стоматология. – 2011. – № 1. – С. 26-32.

Лечение и реабилитация пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта являются одной из наиболее сложных проблем в стоматологии, что находит подтверждение в огромном количестве предложенных для этих целей средств и методов, которые далеко не всегда оказываются эффективными и необходимости использования лекарственных антимикробных препаратов избирательного действия [3, 7, 12].

Для определения вида возбудителя, назначения эффективного лечения и его оценки необходим микробиологический анализ патологического материала. Кроме того, с помощью микробиологической диагностики врач сможет конкретизировать диагноз и составить прогноз развития болезни [14].

Наиболее важными показаниями к проведению микробиологической диагностики являются такие заболевания как:

  1. Острый язвенно-некротический гингивит.
  2. Хронический пародонтит с частым рецидивированием и абсцедированием.
  3. Болезни паро- и периодонта, устойчивые к лечению.
  4. Агрессивные формы болезней пародонта (препубертатный, ювенильный пародонтит, быстропрогрессирующий у взрослых).
  5. Тяжелые формы патологии пародонта на фоне системных заболеваний.
  6. Комплексное лечение заболеваний пародонта с проведением системной антимикробной терапии, лоскутных операций, в случаях сложного протезирования или внутрикостной имплантации зубов, связанных с большими финансовыми затратами.

Сегодня актуальна выработка стандартов диагностических исследований при заболеваниях пародонта, которые могут использоваться в повседневной практике врача-стоматолога [17].

Цель исследования: на основе данных литературы сделать обзор методов диагностики микрофлоры при заболеваниях пародонта, рассмотреть преимущества и недостатки каждого из методов, что даст возможность врачу-стоматологу выбрать тот метод, который будет отвечать его целям, экономическим и техническим возможностям.

Цитологический метод исследования

Содержимое пародонтального кармана изучают по методике П. М. Покровского и М. С. Макаровой в модификации И. А. Бенюмовой (1962). Пародонтальные карманы предварительно промывают изотоническим раствором хлорида натрия, стерильной корневой иглой с турундой производят забор материала.

Забор содержимого из корневого канала проводится на этапе механической обработки корневых каналов стерильным эндодонтическим инструментом (H-файлом) (методика А. А. Кунина, 2003) [16].

Исследуемый материал распределяется на предметном стекле. Препарат фиксируют смесью Никифорова и окрашивают по Граму и Гимзе-Романовскому. Далее материал высушивается и микроскопируется при помощи светового микроскопа [1, 6].

Преимущества: простота в использовании

Недостатки: не позволяет определить вид возбудителя и его чувствительность к антибактериальным препаратам

Метод жидкостной цитологии

Жидкостная тонкослойная цитология – это способ получения монослойных цитолологических препаратов при переносе клеток из фиксирующего или транспортного растворов с использованием методов центрифугирования, осаждения и/или фильтрации.

С помощью урогенитального зонда или стоматологических бумажных адсорбентов производится забор материала из пародонтального пространства. Материал сразу помещается в специальный контейнер (виалу) и отправляется в лабораторию. В лаборатории виалы в базовых штативах помещаются в цитопроцессор, проводится обработка цитологического материала с полным сохранением клеточных и субтканевых структур. Производят окрашивание по методу Папаниколау [10].

Преимущества:

– быстрый и удобный микроскопический анализ: препарат занимает небольшую площадь, клетки располагаются в один слой, в скоплениях хорошо видна структура ядер;

– возможность неоднократного приготовления препаратов из одного и того же контейнера;

– более высокая информативность по сравнению с традиционным цитологическим методом за счет обеспечения сохранности клеточных структур.

Недостатки:

– более высокая, по сравнению с традиционной цитологией, стоимость пробоподготовки;

– необходимость дополнительного оборудования для приготовления препаратов;

– необходимость дополнительного обучения для интерпретации результатов [8].

Бактериологический метод исследования

Забор содержимого пародонтального кармана проводят стерильной ватной турундой на глубине 2 мм. Затем концевую часть турунды промывают в 10 мл физиологического раствора и получают взвесь микроорганизмов [6].

Забор содержимого корневого канала проводится следующим образом. Коронку зуба очищают от зубного налета гигиенической полировочной щеткой с последующей обработкой 3 %-ой перекисью водорода. После препарирования кариозной полости, раскрытия полости зуба, обеспечения эндодонтического доступа в канале H-файлом № 15-20 инструментальными движениями с ирригацией физиологическим раствором создают суспензию инфицированного состава, которую забирают с помощью стерильного бумажного штифта [11].

Образцы полученных проб помещают в транспортные системы и в течение 24 часов доставляют в бактериологическую лабораторию. Далее делают секторальный посев по методике Мельникова-Царева на 5 % кровяном агаре  Шедлера, для идентификации микроорганизмов в современных условиях используют специальные тест-системы [9]. Определяют чувствительность выделенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам, а также к препаратам растений, действие которых активно изучают в последнее время [3, 5].

Преимущества:

– позволяет установить видовой состав микрофлоры;

– возможность определения чувствительности микроорганизмов к определенным антибактериальным препаратам

Недостатки:

– дороговизна;

– чувствительность к забору материала, транспортировке и условиям проведения

ПЦР

Сбор мягкого зубного налета производят методом смыва из пародонтального кармана (в случае патологии) или из десневой бороздки (в случае нормы) с помощью стерильных бумажных эндодонтических штифтов [15].

Сбор твёрдого зубного налета производят следующим образом. После предварительного полоскания ротовой полости водой проводят обработку ватным тампоном зуба с целью полного удаления мягкого налета и соскабливают поддесневой твердый налет, используя кюрету Грейси [14].

Исследуемый материал помещают в пробирки с транспортной средой, предварительная обработка материала не требуется. ПЦР проходит в 3 этапа: выделение ДНК/РНК, амплификация ДНК/РНК-фрагментов, детекция ДНК/РНК-продуктов амплификации. Современные ДНК/РНК тесты способны идентифицировать от 3 до 11 периодонтопатогенов [4, 11, 13, 17].

Преимущества:

– высокая специфичность;

– высокая чувствительность;

– возможность анализа до 96 образцов за один запуск (использование при скрининговых исследованиях большого числа пациентов) [2];

– не требует специальных транспортных сред (для проведения анализа необязательно присутствие живых микроорганизмов);

– быстрый результат (весь процесс с момента передачи в лабораторию занимает не более одного рабочего дня);

– за счет автоматической интерпретации полученных результатов снимается проблема субъективной оценки;

– возможность определения чувствительности к антибактериальным препаратам

Недостатки:

– дороговизна;

– ограничение оценки лекарственной устойчивости (данные о конкретных генетических механизмах резистентности могут отсутствовать, резистентность к препаратам часто связана с различными механизмами и мутациями в различных генах, которые независимо влияют на фенотип);

– возможность ложноположительного результата в результате загрязнения исследуемого материала и ложноотрицательного результата в результате ингибирования реакции компонентами биологических образцов [9].

Таким образом, на клиническом приеме врач-стоматолог при лечении заболеваний пародонта в целях определения вида возбудителя, назначения эффективного лечения и его оценки может использовать различные методы микробиологической диагностики. Выбор определяется преимуществами и недостатками каждого метода. Цитологический метод позволяет определить только наличие микрофлоры без возможности определить вид возбудителя и чувствительность к противомикробным средствам. Метод жидкостной цитологии является более информативным, однако также не дает возможности определения чувствительности к противомикробным средствам и является более дорогим. Бактериологический метод позволяет установить видовой состав микрофлоры, определить чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам, но является еще более дорогим и имеет чувствительность к забору и транспортировке материала. Метод ПЦР позволяет с высокой точностью определить видовой состав микрофлоры, не требователен к забору и транспортировке материала, дает возможность определения чувствительности к антибактериальным препаратам, однако имеет высокую стоимость и возможны ложные результаты.


Библиографическая ссылка

Медведева Л.С., Суворова М.Г. МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПАРО- И ПЕРИОДОНТА // Международный студенческий научный вестник. – 2018. – № 6.;
URL: http://eduherald.ru/ru/article/view?id=19262 (дата обращения: 20.06.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252