Электронный научный журнал
Международный студенческий научный вестник
ISSN 2409-529X

ВЛИЯНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ЭТАНОЛА НА АНТИОКСИДАНТНУЮ АКТИВНОСТЬ ИЗВЛЕЧЕНИЙ ИЗ ПЕРИКАРПИЯ ПЛОДА ГРАНАТА ОБЫКНОВЕННОГО (PUNICA GRANATUM L.)

Окатьева В.Е. 1 Мальцева Е.М. 1
1 ФГБОУ ВО «Кемеровский государственный медицинский университет»
Растительные антиоксиданты представляют значительный интерес для создания эффективных фитопрепаратов обладающих низкой токсичностью и отсутствием нежелательных реакций при длительном применении. Полифенольный комплекс перикарпия граната обыкновенного (Punica granatum L.) обладает выраженными антиоксидантными свойствами и имеет антибактериальную, противогрибковую, противовирусную, противовоспалительную активность. Для исследования были получены извлечения из перикарпия граната обыкновенного с использованием этанола с концентрацией 30 %, 40 %, 50 %, 60 % и 70 %. В полученных извлечениях определено общее содержание полифенольных соединений методом Folin-Ciokalteu и антиоксидантная активность DPPH-методом. Установлено, что использование этанола 40 % концентрации приводит к получению извлечений с высоким содержанием полифенольного комплекса и значительной антиоксидантной активностью в отношении стабильного хромоген-радикала 2,2–дифенил-1–пикрилгидразила. Результаты исследования могут быть использованы при выборе экстрагента при получении фитопрепаратов из перикарпия граната.
гранат обыкновенный
перикарпий граната
антиоксидантная активность
2,2–дифенил-1–пикрилгидразил
1. Твердохлеб Г.В. Технология молока и молочных продуктов: учебник / Г.В. Твердохлеб, Г.Ю. Сажинов, Р.И. Раманаускас. – М.: ДеЛипринт, 2006. – 614 c.
2. Технология молока и молочных продуктов: учебник / Г.Н. Крусь, А.Г. Храмцов, З.В. Волокитина, С.В. Карпычев; ред. А.М. Шалыгина. – М.: КолосС, 2004. – 455 с.
3. Монгуш С.Д., Бондаренко О.В. Химический состав молока аборигенного тувинского скота разных зон разведения // Главный зоотехник: ежемесячный научно-практический 1. Panth N., Manandhar B., Paudel K.R. Anticancer Activity of Punica granatum (Pomegranate): A Review. Phytother Res. 2017 Apr; 31(4): 568–578. doi: 10.1002/ptr.5784.
2. Shaygannia E., Bahmani M., Zamanzad B., Rafieian-Kopaei M.A. Review Study on Punica granatum L. J Evid Based Complementary Altern Med. 2016 Jul; 21(3):221–7. doi: 10.1177/2156587215598039.
3. Barathikannan K., Venkatadri B., Khusro A., Al-Dhabi N.A. et al. Chemical analysis of Punica granatum fruit peel and its in vitro and in vivo biological properties. BMC Complement Altern Med. 2016 Jul 30; 16:264. doi: 10.1186/s12906–016–1237–3.
4. Погосян Р.А., Нестерова О.В., Доброхотов Д.А. Исторический опыт и перспектива использования плодов гранатового дерева в медицине и фармации (Punica granatum L.) // Здоровье и образование в XXI веке. – 2016. – т.18; №5. – С.131–138.
5. Гринкевич Н.И., Сафронич Л.Н. Химический анализ лекарственных растений. – М., 1983. – 176 с.
6. Мальцева Е.М., Егорова Н.О., Егорова И.В., Мухамадияров Р.А. Антиоксидантная и антирадикальная активность in vitro экстрактов травыSanguisorba officinalis L., собранной в разные фазы развития // Медицина в Кузбассе. – 2017. – Т.16; № 2. – С. 32–38.

Гранат обыкновенный (Punica granatum L.) сем. Дербенниковые (Lythraceae) имеет тысячелетнюю историю использования, как в народной, так и официальной медицине. Все части этого растения, а особенно плоды, содержат комплекс ценных веществ с выраженной биологической активностью. Основной группой биологически активных соединений граната являются полифенольные соединения, представленные гидролизуемыми танинами и эллаготанинами (энотеин, пуникалин, пуникалагин, пуникакортеин и др.), флавоноидами (кемпферол, кверцетин, апигенин, лютеолин и др.), катехинами, антоцианами (дельфинидин, цианидин), фенолкарбоновыми кислотами (галловая, эллаговая и кофейная кислоты) оказывающими выраженное антиоксидантное, антибактериальное, противогрибковое, антиканцерогенное, противовоспалительное, фотопротекторное действие и другие виды активности [1, 2, 3, 4].

Перикарпий плода граната составляет около 50 % от общего веса плода и является отходом при получении гранатового сока. Однако перикарпий содержит намного больше соединений фенольного характера, чем гранатовый сок и представляет интерес как источник биологически активных веществ для создания фармацевтических препаратов, биологически активных добавок и лечебной косметики, обладающих антиоксидантным действием. Изучение влияния концентрации водно-спиртовых растворов на количественное содержание суммы полифенольных соединений и их антиоксидантную активность представляет большой интерес при выборе экстрагента для получения фитопрепаратов.

Цель данного исследования заключалась в оценке антиоксидантной активности (АОА) водно-спиртовых извлечений перикарпия плода граната (Punica granatum L.) полученных с различной концентрацией этанола.

Материалы и методы. Плоды коммерческих сортов граната приобретены в торговой сети г. Кемерово. Средний вес плода составил 420±54 г. Перикарпий плода граната, после удаления семян, сушили при температуре 30–35оС в течение 24 часов. Высушенный перикарпий измельчали до размера частиц проходящих сквозь сито с размером 0,5 мм. Порошок измельченного перикарпия хранили в темном сухом прохладном месте.

Все реактивы и растворители имели квалификацию «хч» и «чда».

Извлечения из перикарпия плода граната получали с использованием водных растворов этилового спирта с концентрацией 30, 40, 50,60 и 70 % методом мацерации в течение 10 дней. Для исследования АОА извлечения концентрировали до водного остатка и высушивали в вакууме. Определение влажности проводили согласно методике ОФС 1.2.1.0010.15 «Потеря в массе при высушивании» ГФ XIII. Качественные реакции на полифенольные соединения проводили общепринятыми методами [5].

Спектрофотометрическое определение суммы полифенольных соединений методом Folin-Ciokalteu. Для определения суммарного содержания полифенольных соединений в экстрактах перикарпия граната использован метод спектрофотометрии, основанный на восстановлении смеси фосфорновольфрамовой и фосфорномолибденовой кислот в щелочной среде по методике 2 ОФС.1.5.3.0008.15 «Определение содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препарата». Расчет количественного содержания суммы полифенольных соединений проведен в пересчете на галловую кислоту.

Около 0,05 г полученных экстрактов (точная навеска) помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяли в 50 % этаноле и доводили объем раствора до метки тем же растворителем. 5 мл полученного раствора помещали в мерную колбу на 50 мл и доводили объем до метки 50 % этанолом (раствор А). 2 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляли 1 мл фосфорномолибденововольфрамового реактива, 10 мл воды и доводили объем раствора до метки 10,6 % раствора натрия карбоната. Через 30 минут измеряли оптическую плотность испытуемого раствора при длине волны 760 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения 50 % этанол.

Параллельно измеряли оптическую плотность стандартного раствора галловой кислоты. 0,05 г галловой кислоты (точная навеска) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в воде и доводили объем раствора до метки. 5 мл полученного раствора помещали в мерную колбу на 100 мл и доводили объем до метки водой (стандартный раствор).

Содержание суммы полифенольных соединений (Х %) в экстрактах определяли по формуле:

kz1.wmf,

где Ах – оптическая плотность исследуемого раствора; Аст – оптическая плотность стандартного раствора галловой кислоты; mст – масса навески галловой кислоты, г, W – потеря в массе при высушивании, %.

Антиоксидантную активность определяли спектрофотометрическим DPPH- методом [6], основанным на взаимодействии веществ, проявляющих антиоксидантную и антирадикальную активность со стабильным хромоген-радикалом 2,2–дифенил-1–пикрилгидразилом (DPPH). Готовили серию разведений из полученных извлечений с содержанием от 5 до 150 мкг/ мл, объем каждого образца доводили до 1 мл 50 % этанолом и добавляли 4 мл рабочего раствора DPPH. Раствор перемешивали и через 30 минут измеряли оптическую плотность раствора при длине волны 517 нм. В качестве контрольного образца использовали рабочий раствор DPPH.

Антиоксидантную активность определяли по формуле:

kz2.wmf,

где Ах – оптическая плотность исследуемого раствора, Аконтроль – оптическая плотность контрольного образца.

Спектрофотометрические исследования проводили на фотометре КФК-3 (Россия) в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм.

Все измерения выполнены в трехкратной повторности. Статистическую обработку результатов измерения проводили согласно требованиям ОФС.1.1.0013.15 «Статистическая обработка результатов эксперимента». Корреляционный анализ выполнен с применением стандартной программы Microsoft Office Excel 2010.

Результаты и обсуждение. Все полученные извлечения представляли собой густые вязкие массы красновато-коричневого цвета с содержанием влаги не более 25 %. При проведении фитохимического анализа с помощью качественных реакций во всех исследуемых извлечениях были обнаружены гидролизуемые танины, эллаготанины, катехины, антоцианы и флавоноиды.

Результаты определения содержания суммы полифенольных соединений в изучаемых извлечениях приведены в табл. 1. Как видно из полученных данных, концентрация этанола незначительно влияет на процесс экстакции полифенолов, однако наибольшей экстрагирующей способностью обладает 40 % этанол. Использование этого экстрагента позволяет повысить выход полифенолов из перикарпия плода граната до 22 %.

Для определения АОА извлечений из перикарпия плода граната применялся статический метод DPPH [6]. Для каждого извлечения был построен график зависимости АОА от концентрации (мкг/мл) и проведен корреляционный анализ (табл. 1).

Таблица 1

Содержание полифенольных соединений и антиоксидантная активность извлечений из перикарпия граната

Экстрагент

Содержание полифенольных соединений, X %

Уравнение парной линейной регрессии

y = b + ax

Коэффициент

корреляции

r

IC50, мкг/мл

30 % этанол

21,28±0,32

y = 33,59 + 0,505x

0,984

32,49±1,42

40 % этанол

24,00±0,12

y = 41,89 + 0,357x

0,987

22,72±3,51

50 % этанол

19,65± 0,23

y = 34,06 + 0,442x

0,975

36,06±4,35

60 % этанол

20,36±0,01

y = 22,83 + 0,820x

0,929

33,13±2,47

70 % этанол

22,14±0,10

y = 21,04 + 1,006x

0,984

28,79±1,68

Величиной АОА изучаемых извлечений была выбрана концентрация, приводящая к ингибированию 50 % радикалов DPPH – IC50. Показано, что извлечение из перикарпия граната, полученное с помощью 40 % этанола, обладает большей АОА. Его IC50 превышает значения, полученные для других извлечений от 28 % до 58 %.

Таким образом, исходя из результатов исследования, установлено, что для получения фитопрепаратов из перикарпия плода граната с высоким содержанием полифенольного комплекса и выраженной АОА следует использовать 40 % этанол.


Библиографическая ссылка

Окатьева В.Е., Мальцева Е.М. ВЛИЯНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ЭТАНОЛА НА АНТИОКСИДАНТНУЮ АКТИВНОСТЬ ИЗВЛЕЧЕНИЙ ИЗ ПЕРИКАРПИЯ ПЛОДА ГРАНАТА ОБЫКНОВЕННОГО (PUNICA GRANATUM L.) // Международный студенческий научный вестник. – 2018. – № 4-4.;
URL: http://eduherald.ru/ru/article/view?id=18846 (дата обращения: 07.03.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074